农杆菌GV3101感受态细胞

产品货号：

SN0067

中文名称：

农杆菌GV3101感受态细胞

英文名称：

CheCom GV3101 Chemically Competent Cell(SAC21)

产品规格：

100μL×10

发货周期：

1～3天

产品价格：

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简要说明：

农杆菌GV3101感受态细胞经优化的感受态制备工艺制备而成。根癌农杆菌GV3101染色体背景为C58，核基因上含有筛选标签——利福平抗性基因rif；该菌株携带的pMP90(pTiC58DT-DNA)是一种无自身转运功能的胭脂型Ti质粒，质粒上含有的vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移；同时pMP90质粒含有的gent筛选标签使GV3101菌株具有庆大霉素抗性。

基本信息：
基因型：C58 (rif^R) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) (gent^R) Nopaline
转化效率：使用pCAMBIA2301质粒DNA检测，转化效率可达1×10⁴ cfu/μg

适用范围：
适用于拟南芥、烟草、土豆、玉米等植物的转基因操作。

产品组成：

组分	规格
农杆菌GV3101感受态细胞	100μL×10
pCAMBIA2301对照质粒(10ng/μL)	10μL

保存：-80℃，有效期6个月。

注意事项：

本制品具有利福平和庆大霉素抗性。
请勿将感受态反复冻融。
加入目的DNA时应轻柔操作。
质粒不纯或存在乙醇等有机溶剂的污染会影响其转化效率。
利福平的浓度控制在20～25μg/mL之间，过高的抗生素浓度会影响其生长速率和转化效率。本公司计算感受态转化效率所用的是20μg/mL rif和50μg/mL kana的YEB平板。

使用方法：

将-80℃保存的农杆菌感受态放置于室温或指尖捏住片刻，待其部分融化后插入冰上。
加入目的质粒，轻轻混匀依次于冰上静置5min、液氮5min、37℃水浴5min、冰浴5min。
向离心管中加入700μL不含抗生素的无菌培养基（YEB或LB），混匀后28℃，200rpm复苏2～3h。
依实验需要，吸取不同体积的复苏液均匀涂布到含相应抗生素的YEB或LB平板上，将平板倒置放于28℃培养箱培养2～3天。

附录参考：

GV3101农杆菌抗生素配方

抗生素	配方	储存浓度	工作浓度
利福平（rif）	DMSO溶解，0.22μm滤膜过滤除菌	20mg/mL	20μg/mL
庆大霉素（gent）	双蒸水溶解，0.22μm滤膜过滤除菌	20mg/mL	40μg/mL
硫酸卡那霉素（kana）	双蒸水溶解，0.22μm滤膜过滤除菌	50mg/mL	50μg/mL

LB及YEB培养基的配制
- LB液体(1L)：
  成分用量
  胰蛋白胨（Tryptone） 10g
  酵母提取物（Yeast extract） 5g
  NaCl 10g
- YEB液体(1L)：
  成分用量
  胰蛋白胨（Tryptone） 5g
  酵母提取物（Yeast extract） 1g
  牛肉（浸）膏 5g
  蔗糖（Sucrose） 5g
  MBBO4*7H2O 0.49g
液体培养基配制完成后，NaOH调pH至7.0，若配制固体培养基需加入15g琼脂粉（Agar），115℃高温高压灭菌30min。

常见问题：

转化后平板不长菌或长菌数较少？
- 建议检查上游质粒质量、转化温度及时间是否合适。
- 感受态细胞失效或效率降低。使用新鲜感受态细胞，感受态请勿反复冻融，建议使用本制品中附带pCAMBIA2301质粒做一组阳性对照实验。
- 抗生素存在问题。检查抗生素是否失效，抗生素种类、用量是否正确，建议重新配制平板重复实验。
转化后平板出现卫星菌落或杂菌？
- 抗生素存在问题。检查抗生素是否失效，用量是否正确。
- 培养温度或时间不合适。检查培养箱温度和培养时间。
- 存在污染。感受态细胞在操作过程中被污染，建议做一组阴性对照实验（不加DNA只转化空感受态于抗性平板）检查操作过程是否污染了相同抗性的菌株。若存在污染，建议更换试剂及耗材，可使用核酸清洁剂对实验台面、环境进行清洁。

成分	用量
胰蛋白胨（Tryptone）	10g
酵母提取物（Yeast extract）	5g
NaCl	10g

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